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蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)(Label Free)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度,從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。
基于SILAC和iTRAQ的定量蛋白組學(xué)研究技術(shù)都是*先標(biāo)記蛋白然后利用質(zhì)譜進(jìn)行分析;盡管提供的蛋白定量信息量巨大,但是標(biāo)記試劑比較昂貴,每一個(gè)樣品的成本較大,因此比較適合在整個(gè)蛋白組水平上對(duì)蛋白的表達(dá)變化進(jìn)行定量的分析;對(duì)于相對(duì)簡(jiǎn)單的蛋白混合物,比如說co-IP的樣品來說,投入產(chǎn)出比比較低;對(duì)于某些翻譯后修飾方式的蛋白組學(xué)研究來說,比如泛素化研究,本身泛素化就是發(fā)生在賴氨酸上側(cè)鏈上,對(duì)于泛素化肽段的富集是利用針對(duì)賴氨酸側(cè)鏈上殘留的兩個(gè)甘氨酸(gly-gly)的抗體來實(shí)現(xiàn)的,但是iTRAQ試劑的標(biāo)記會(huì)對(duì)此富集過程產(chǎn)生很大的影響,因此就不能使用iTRAQ標(biāo)記技術(shù)對(duì)組織樣品的泛素化修飾進(jìn)行組學(xué)水平上的分析。Label Free定量分析技術(shù)就是基于此實(shí)驗(yàn)需求建立起來的定量蛋白組學(xué)技術(shù)。 同一個(gè)肽段在質(zhì)譜分析過程中離子化效率相同,質(zhì)譜峰的面積就直接代表了該肽段量的多少,因此可以直接通過比較同一肽段質(zhì)譜峰面積的方法直接得到該肽段所代表的蛋白的相對(duì)定量信息。
百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái),Orbitrap Fusion質(zhì)譜平臺(tái),Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,推出基于Label Free的定量蛋白組分析服務(wù)技術(shù)包裹,您只需要將您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康母嬖V我們并將您的細(xì)胞寄給我們,我們會(huì)負(fù)責(zé)項(xiàng)目后續(xù)所有事宜,包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞標(biāo)記、蛋白提取、蛋白酶切、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。
1. 如果您提供的是co-IP樣品,蛋白需求量在2-5ug左右,在寄送蛋白樣品中不要包含去污劑(例如SDS)以及高的氧濃度;或者您可以直接將含有蛋白樣品的beads寄給我們,由我們負(fù)責(zé)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
2. 如果您提供的是組織樣品,請(qǐng)您干冰將組織樣品寄給我們;動(dòng)物樣本大于200mg,血液樣品至少1ml(血漿注意用EDTA防凝),血清0.2-0.5ml,尿液2ml,植物樣品至少1g,細(xì)胞樣品為1X107個(gè)細(xì)胞,酵母、微生物等干重200mg。
3. 如果您提供的是蛋白樣品,請(qǐng)您保證蛋白總量在50ug以上;蛋白提取時(shí)使用普通的組織、細(xì)胞裂解液即可。
4. 樣品運(yùn)輸:請(qǐng)使用足量的干冰運(yùn)輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運(yùn)輸過程中樣品降解的可能性。
在技術(shù)報(bào)告中,百泰派克會(huì)為您提供詳細(xì)的中英文雙語版技術(shù)報(bào)告,報(bào)告包括:
1. 實(shí)驗(yàn)步驟(中英文)
2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)(中英文)
3. 鑒定的磷酸化位點(diǎn)的詳細(xì)信息
4. 質(zhì)譜圖片
5. 原始數(shù)據(jù)
您只需下單-寄送樣品
百泰派克一站式服務(wù)完成:樣品處理-上機(jī)分析-數(shù)據(jù)分析-項(xiàng)目報(bào)告
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